El ribosido de nicotinamida, una forma de vitamina B3, protege contra la degeneración axonal inducida por excitotoxicidad-10

La conversión extracelular de NAD + en NR es necesaria para prevenir la neurodegeneración inducida por FK866

Luego evaluamos la ruta metabólica desde NAD + / NMN / NR extracelular hasta NAD + intracelular en la neurodegeneración inducida por FK866. Primero, las neuronas corticales se cotrataron con 50m MFK866, 50mMNR y 50mMDP durante 72 h, y se investigó la fragmentación axonal. DP solo limitó parcialmente el efecto protector de NR contra FK866 (protección axonal reducida en un 40%), mientras que el efecto protector de NR se inhibió totalmente bajo el estrés NMDA (Figuras 4C y 7A). Estos datos sugieren que el tratamiento con FK866 induce la expresión de NT que es relativamente resistente a DP. Analizamos ENT1-4 ARNm en neuronas corticales tratadas o no con FK866 10 mM durante 72 h. ENT2 y -4mRNA fueron inducidos 2.2 y 1.7 veces, respectivamente, por FK866 (Figura complementaria S3). NAD + y NMN también impidieron la neurodegeneración inducida por FK866 de una manera que fue parcialmente evitada por DP (Fig. 7B, C). Como NAD + puede depender de NT en la protección contra la neurodegeneración FK866, probamos si NAD + y NMN extracelulares deben convertirse a NR antes del transporte a través de la membrana plasmática. De hecho, CMP bloqueó completamente el efecto protector de axón de NAD + y NMN, lo que indica la Figura 5. NMN requiere la conversión a NR y transportadores de nucleósidos para prevenir AxD inducida por NMDA. A) Representación esquemática del metabolismo extracelular de NAD +: NAD + se convierte en NMN a través de ENPPase y luego en NR a través de ENTase. B) Cuantificación de AxD en neuronas corticales tratadas con NMDA 100 mM durante 24 h después de bloquear la vía extracelular por DP, un inhibidor de ENT, o CMP, un inhibidor de ENTasa. NMDA, NMN, DP y CMP se agregaron como se indica (n = 3–7). C) Cuantificación de AxD en neuronas corticales tratadas con NMDA 100 mM durante 24 h después de bloquear la vía extracelular por DP o CMP. NMDA, NAD +, DP y CMP se agregaron como se indica (n = 3–7). * P, 0.05, ** P, 0.01. NR PROTEGE CONTRA LA NEURODEGENERACIÓN EXCITOTÓXICA 9 Descargado de que ambas moléculas requieren que la actividad 59-ENTasa se convierta en NR y media su efecto protector axónico (Fig. 7B, C). También analizamos la expresión de ARNm Nmrk1 y -2 en neuronas corticales tratadas o no con FK866 durante 24-72 h. Como se esperaba, el ARNm de Nmrk1 se expresó altamente en comparación con el transcrito de Nmrk2, que no era detectable (Figura complementaria S4B, C). Como se describió previamente con NMDA, el tratamiento con FK866 durante 48 o 72 h indujo Nmrk2 (3 veces a las 72 h). Como la inducción de Nmrk2 fue un fenómeno común observado en nuestros experimentos, utilizamos neuronas corticales de tipo salvaje o Nmrk 2-KOmice. Estas neuronas se trataron con 10 mMFK866 durante 72 h antes de analizar los núcleos condensados y la fragmentación axonal. Incluso en ausencia del gen Nmrk2, NAD + y NR proporcionaron protección completa contra la neurodegeneración inducida por FK866, lo que indica que Nmrk2 no es necesario para estos efectos (Figura complementaria S4D, E). Estos resultados demuestran que NAD +, NMN y NR utilizan una vía similar, probablemente independiente de Nmrk2, para prevenir la neurodegeneración inducida por FK866.

nmn-2